✴️ Treponema pallidum Real-time PCR

MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ

Mục đích

Xác định sự có mặt của Treponema pallidum trong dịch sinh dục của người.

Nguyên lý

Dựa trên nguyên lý kỹ thuật Real-time PCR. 

CHUẨN BỊ

Người thực hiện

Người thực hiện: Nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh (và/hoặc sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).

Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người thực hiện có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh (và/hoặc sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).

Phương tiện, hóa chất (Ví dụ hoặc tương đương)

Trang thiết bị

Tủ an toàn sinh học cấp 2

Máy ủ nhiệt

Máy ly tâm > 12000 gpm/phút

Máy ly tâm dùng cho tube 0,2 ml

Máy vortex

Máy Real-time PCR của hãng Eppendoft 

Ống Eppendorf 1,5 ml ho c 2 ml

Các loại Micropipette điều chỉnh được: 1000µl, 200µl, 100µl, 10µl

Đầu côn có màng lọc 10 μl, 100 μl, 200 μl và 1000 μl

Tủ lạnh thường

Tủ âm sâu (20⁰C) hoặc (-70⁰C) (nếu có)

Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)

Ghi chú: 

Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/200 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm).

Bệnh phẩm

Dịch cơ thể nghi ngờ có căn nguyên do Treponema pallidum gây bệnh: Tổn thương loét, đào ban, vết trợt, hạch…

Phiếu xét nghiệm

Điền đầy đủ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu

CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên.

Lấy bệnh phẩm

Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh (Xem phụ lục).

Tiến hành kỹ thuật

Tách chiết DNA theo hướng dẫn sử dụng của Kit tách chiết DNA 

Cho một lượng mẫu DNA tách chiết được vào các ống phản ứng PCR có chứa các thành phần cần thiết của kit 

Chạy phản ứng PCR theo chu trình nhiệt thích hợp trên máy Real-time PCR 

Đọc kết quả

NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

Bước 1: Kiểm tra chứng âm

Bước 2: Kiểm tra chứng dương

Bước 3: Xác định mẫu dương tính với Treponema pallidum

Bước 4: Xác định mẫu âm tính với Treponema pallidum

NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

Phản ứng dương tính giả: do tạp nhiễm từ môi trường

Phản ứng âm tính giả: do phản ứng PCR bị ức chế

Để hạn chế các hiện tượng trên phải tuân thủ chặt chẽ quy trình kỹ thuật

Bệnh viện Nguyễn Tri Phương - Đa khoa Hạng I Thành phố Hồ Chí Minh

  facebook.com/BVNTP

  youtube.com/bvntp