✴️ Định lượng Interleukin- I beta (IL-I beta)

NGUYÊN LÝ

Xét nghiệm miễn dịch IL-Ib dựa trên nguyên lý “sandwich” hóa phát - quang miễn dịch nhằm mục đích tìm nồng độ IL-Ib trong huyết thanh và huyết tương người.

CHUẨN BỊ

Người thực hiện: Người thực hiện xét nghiệm có trình độ phù hợp.

Phương tiện, hóa chất: Bộ kít bao gồm

CTK DIL ASY   1 x 14ml

CTK CONJ   1 x 20 ml

CTK BIOCHIP   54 biochips

CTK CAL   9 x 1ml

REAG SGNL-EV701   2 x 10 ml

BUF WASH (conc. )   1 x 32 ml

Calibrator concentration Disc và Barcode 1

Người bệnh: Cần được tư vấn về mục đích của việc làm xét nghiệm.

Phiếu xét nghiệm: Có y lệnh của bác sỹ lâm sàng ghi trên phiếu xét nghiệm.

CÁC BƯƠC TIẾN HÀNH

Bệnh phẩm

Mẫu bệnh phẩm là huyết thanh hoặc huyết tương không tiêu huyết

Việc lấy mẫu được thực hiện theo đúng hướng dẫn và đúng ống đựng mẫu, không rò rỉ hoặc thấm ra ngoài

Những mẫu cần pha loãng phải được pha với dung dịch đệm rửa

Nếu mẫu không được xét nghiệm ngay, cần phải bảo quản ở -20⁰C từng phần nhỏ, tránh rã đông nhiều lần

Tiến hành kỹ thuật

Độ nhạy của máy là 1. 6 pg/ml. với độ nhạy này thì nồng độ thấp nhất cho phép là ≤ 20% cho 20 lần lặp lại.

Khoảng phát hiện của phép thử: 0-250 pg/ml. Tuy nhiên có thể thay đổi tùy vào lô chất hiệu chuẩn

Ngoại kiểm tra: Lặp lại 20 lần cho một mẫu bệnh phẩm ở 3 mức nồng độ khác nhau (n=20).

Nội kiểm tra chất lượng: Lặp lại 2 lần cho một mẫu bệnh phẩm ở 3 mức nồng độ khác nhau cho 10 xét nghiệm khác nhau (n=20)

 Các bước thực hiện:

+ Hút 200 ul dung dịch pha loãng vào mỗi giếng

+ Hút 100 ul dung dịch chuẩn, mẫu và chứng vào các giếng thích hợp

+ Hòa trộn dung dịch bằng cách gõ nhẹ vào các cạnh của đĩa

+ Đặt đĩa vào đế ủ lắc nhiệt. Ủ ở 37⁰C trong vòng 1 giờ và lắc 370 vòng/phút

+ Lấy khay chứa khỏi máy lắc. Loại bỏ dịch thừa

+ Rửa nhanh 2 lần với dung dịch đệm rửa khoảng 350 ul cho mỗi giếng, tránh nhiễm chéo giữa các giếng và dùng giấy thấm để thấm khô sau khi rửa

+ Hút 300 ul dung dịch conjugate vào mỗi giếng

+ Gõ nhẹ vào các cạnh của khay chứa để hòa trộn dung dịch

+ Đặt khay vào máy lắc nhiệt, Ủ trong vòng 1 giờ ở 37⁰C với tốc độ lắc 370 vòng/ phút

+ Sau đó, lấy khay ra khỏi máy lắc và loại bỏ dịch thừa

+ Lập lại rửa 2 lần như trên

+ Sau khi rửa, làm đầy giếng với dung dịch đệm rửa và để cho thấm không quá 30 phút trước khi chụp hình

NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

IL-1β được chứng minh ngăn cản việc tiết insulin và giảm hàm lượng insulin và glucagons do đó đóng vai trò quan trọng trong phát triển bệnh tiểu đường type I

NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

Đây là phương pháp dùng trong nghiên cứu, không dùng trong chẩn đoán

Phương pháp điều tra dấu chứng Interleukin IA chỉ sử dụng trong phân tích mẫu huyết thanh và huyết tương người. Do đó những phân tích trên chất khác sẽ cho kết quả không chính xác (ví dụ như lỗi kỹ thuật hay lỗi phương pháp)

Ảnh hưởng của Bilirubin, Hemoglobin, Triglycerides và Lipids gây nhiễu nồng độ IL-Iα và là nguyên nhân tăng hay giảm đường biểu diễn nồng độ trên biểu đồ.

Bệnh viện Nguyễn Tri Phương - Đa khoa Hạng I Thành phố Hồ Chí Minh

  facebook.com/BVNTP

  youtube.com/bvntp