MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ
Mục đích:
Phát hiện gene kháng thuốc c a Neisseria gonorrhoreae trong mẫu bệnh phẩm của người.
Nguyên lý:
Dựa trên nguyên lý kỹ thuật PCR.
CHUẨN BỊ
Người thực hiện:
Người thực hiện: Nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành vi sinh (và / hoặc sinh học phân tử / sinh học / công nghệ sinh học).
Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người thực hiện có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành vi sinh (và / hoặc sinh học phân tử / sinh học / công nghệ sinh học).
Phương tiện, hóa chất (Ví dụ hoặc tương đương):
Trang thiết bị:
Tủ an toàn sinh học cấp 2.
Máy ủ nhiệt.
Máy ly tâm > 12000 gpm / phút.
Máy ly tâm dùng cho tube 0,2 ml.
Máy vortex - Máy PCR .
Bộ lưu điện.
Ống Eppendorf 1,5 ml hoặc 2 ml.
Các loại Micropipette điều chỉnh được: 1000µl, 200µl, 100µl, 10µl.
Đầu côn có màng lọc 10 μl, 100 μl, 200 μl và 1000 μl.
Tủ lạnh thường.
Tủ âm sâu (20oC) hoặc (-70oC) (nếu có).
Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm):
Ghi chú:
Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/200 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm).
Bệnh phẩm:
Dịch niệu đạo, cổ tử cung hoặc chủng vi khuẩn lậu.
Phiếu xét nghiệm:
Điền đầy đủ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu.
CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ trên.
Lấy bệnh phẩm:
Theo đúng quy định c a chuyên ngành vi sinh.
Tiến hành kỹ thuật:
Tách chiết DNA tổng số.
Thực hiện PCR.
Điện di kiểm tra sản phẩm.
Đánh giá và kết luận.
NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
Sản phẩm PCR phải có một băng đặc hiệu duy nhất, rõ nét, không bị đứt gẫy và có kích thước tương ứng với đoạn gene đích cần khuếch đại.
NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ
Khi kết quả khi chứng âm và / hoặc chứng dương không hợp lý, cần phải kiểm tra lại quá trình tách chiết DNA tổng số, chất lượng primers và master mix, sau đó thực hiện lại xét nghiệm.
Bệnh viện Nguyễn Tri Phương - Đa khoa Hạng I Thành phố Hồ Chí Minh
