✴️ Xét nghiệm xác định đột biến gen EGFR và K-RAS bằng giải trình tự chuỗi DNA trên khối Paraffin
ĐẠI CƯƠNG
Xác định đột biến gen bằng giải trình tự chuỗi là phương pháp sử dụng các kỹ thuật sinh học phân tử nhằm xác định các đột biến gen.
CHỈ ĐỊNH
Theo chỉ định của Bác sĩ lâm sàng
HÓA CHẤT VÀ TRANG THIẾT BỊ
Máy PCR
Máy giải trình tự gen
Các hóa chất đi kèm
CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Bệnh phẩm được cắt làm tiêu bản dùng cho chẩn đoán giải phẫu bệnh.
Vùng mô ung thư được đánh dấu trên lam kính
Cạo mô ung thư bào tube ly tâm 1,5 ml
Cho xylen vào tube ly tâm 2 lần để khử paraffin
Rửa lại bằng ethanol và để khô trước khi ủ với proteinase K ở 480C/16 giờ
Tinh sạch sản phẩm DNA
Kết tủa DNA bằng ethanol tuyệt đối
Tách DNA bằng kit KAPA
Khuyếch đại exon bằng PCR Master Mix của KAPA
Chạy điện di trên gel Argarone 1
Tinh sạch sản phẩm PCR bằng nitrogen kit
PCR sản phẩm đã tinh sạch với BigDye kit
Tinh sạch sản phẩm BigDye bằng Zymmo kit
Giải trình tự gen bằng máy ABI 3130
Phân tích kết quả giải trình tự bằng phần mềm có sẵn
ĐỌC KẾT QUẢ
Kết quả được phân tích bằng phần mềm tương thích. Kết quả được đối chiếu với trình tự nucleotid trên DNA bình thường trong hệ thống dữ liệu ngân hàng gen để xác định chính xác nucleotid đột biến.
Bệnh viện Nguyễn Tri Phương - Đa khoa Hạng I Thành phố Hồ Chí Minh
BÀI VIẾT KHÁC
